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C18液相色谱柱坏了?那是你没有保护好
点击次数:35 发布时间:2019-05-07 返回
   C18液相色谱柱坏了?那是你没有保护好
  C18液相色谱柱是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式,任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分,这部分越大,一般保留值越高,在液相色谱中这是应用面较广的一种分离模式,在生物大分子的反相液相色谱条件下,流动相多采用酸性的、低离子强度的水溶液,并加一定比例的能与水互溶的异丙醇、乙腈或甲醇等有机改性剂,大量使用的填料为孔径在30纳米以上的硅胶烷基键合相,除此之外,也有少量高聚物微球。
  在液相色谱柱的使用中,我们会发现很多实验室会面临C18液相色谱柱频繁损坏的问题。那么,我们该如何预防呢?
  1、在液相系统中加入在线过滤器
  在线过滤器的内部颗粒空隙一般是0.5微米,对于UHPLC会选择0.2微米空隙的在线过滤器。这个空隙尺寸和柱头的过滤筛板尺寸接近或者略小。所以,在线过滤器能够有效的阻隔来自样品、泵头密封垫、自动进样器的转子密封垫的颗粒物,以防止柱头过滤筛板的堵塞。
  注意:但是对于非常低死体积的液相系统,在线过滤器的加入可能会导致系统死体积增大峰展宽变严重的问题。而对于大多数的液相系统而言,色谱图不会有太大变化。
  2、在C18液相色谱柱前端使用保护柱
  保护柱有很多种,通用型、一体式、卡套式,但是它其实是一个和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子。因为它具有和分析柱相同的内部填料,所以保护柱不仅可以阻隔颗粒物,还可以阻隔易吸附的样品基质组分。
  注意:由于保护柱中可能有大量的强保留组分,在用强溶剂清洗系统时请取下保护柱,以防止这些强保留组分被洗脱进分析柱。保护柱如果出现吸附饱和也可能会对分离效果有影响
  3、对样品进行净化处理
  有一些液相的分析方法没有明确标注样品的净化,但我希望大家在使用C18液相色谱柱做分析时都能够考虑样品的净化,常用的方案是对样品进行过滤。
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